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人成纤维生长因子-21(FGF-21)试剂盒说明书_亚搏体育app网站官网资讯


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人成纤维生长因子-21(FGF-21)试剂盒说明书

亚搏体育app下载08月16日 10:42   来源:上海西唐生物科技有限亚搏体育app网站
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人成纤维生长因子-21(FGF-21)ELISA试剂盒

 (用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)

一、原理:

     本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 FGF-21 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 FGF-21与单抗结合,加入生物素化的抗人FGF-21,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止液硫酸,在450nm处测OD值,FGF-21浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中FGF-21浓度。

二、试剂盒组成2-8℃保存)

酶标(Coated Wells)

96

酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate)

12ml

10×标本稀释液(Sample Buffer)

12ml

20×浓缩洗涤液(Wash Buffer)

50ml

标准品(Standards)20ng/ml

1

底物工作液(TMB Solution)

12ml

第一抗体工作液(Biotinylated Antibody

6ml

终止液(Stop Solution)

12ml

三、准备试剂与收集血样:

  1. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。
  2. 收集标本:血清、血浆(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8保存48小时;更长时间须冷冻(-20 ℃或-70 )保存,避免反复冻融。
  3. 标准品液配制:取8个1.5ml离心管,第一管加标本稀释液900ul,第二至第八管加入标本稀释液500ul。在第一管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出500ul,移至第二。如此反复作对倍稀释,从第七中吸出500ul弃去。第八为空白对照。

    4.洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)

四、检测程序:

  1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置3740分钟。
  2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。
  3. 每孔加入蒸馏水和第一抗体工作液各50ul(空白除外)。将反应板充分混匀后置37℃20分钟。
  4. 洗板:同前。
  5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置3710分钟。
  6. 洗板:同前。
  7. 每孔加入底物工作液100ul,置37 暗处反应15分钟。
  8. 每孔加入100ul终止液混匀。
  9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

五、结果计算与判断:

  1.所有OD值建议减除空白值后再行计算。如空白OD低于0.1,也可以直接计算。

   2.以标准品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0 pg/ml为横坐标,OD值为纵坐标,使用软件作图,画出标准曲线。

   3.根据样品OD值计算出相应FGF-21含量。软件可以向本亚搏体育app网站邮件索取。

六、试剂盒性能:

1.灵敏度:最小的FGF-21 检测浓度小于15pg/ml。
2.特异性:可同时检测重组或天然的人FGF-21。不与人其它细胞因子有交叉反应。
3.重复性:板内、板见变异系数均小于10%。

七、注意事项:

1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线。
 2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。
 3. 检测时所有试剂都要恢复到室温。板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。
 4. 试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。
 5. 说明书中试剂盒组成为96T的量,48T的量应减半!
 6. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。仅用于科研,不能用于临床诊断!

 

 

 

 

  

 


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