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蛋白分离色谱与高压制备液相色谱的异同讨论

2018年07月18日 09:44   来源:上海汉尧仪器设备有限亚搏体育app网站
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  快速蛋白液相色谱(FPLC)、中压液相色谱(MPLC)、低压液相色谱(LPLC)是近年来从HPLC基础上发展的新型色谱技术,其中FPLC能以极快的速度把复杂混合物分离,可在短时间内大量纯化样品,具有柱容量大、回收效率高及生物大分子不易失活等特性,在生命科学研究及药物生产上使用越来越广泛。

(1)FPLC与HPLC相同的是:都采用输液泵、高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和计算机控制等设备,均具有快速、分辨率高、分离效能高等特点。

(2)FPLC与HPLC不同的是:HPLC的管道系统多采用金属材料,流动相由往复泵或隔膜泵驱动,使用高压,色谱柱内径小,分析精度高,大流速通常不超过20 mL/min(有些制备级HPLC可达300 mL/min),有时需使用一定浓度的有机溶剂,适用于微量样本检测或少量纯化制备;FPLC的管道系统是由耐高压的塑料管组成,流动相多由柱塞式泵驱动,中低压,所用色谱柱内径大,流速范围0~100 mL/min(大流速可达1 000 mL/min),分析精度没有HPLC高,只使用常规无机盐溶液,适于大规模纯化样品。

(3)应用范围:HPLC可分析低沸点低相对分子质量分子、高沸点中分子、高分子有机化合物(包括极性、非极性)、离子型无机化合物、热不稳定生物分子;FPLC专门用于蛋白质、多肽及多核苷酸的分离纯化

    高压制备系统(HPLC)可以涵盖FPLC的功能,但是在高盐的实验环境下,泵的选择就需要非常谨慎,隔膜泵会是一个不错的选择。常规来说流速超过3升以上的部分,PTFE、PFA、玻璃等材质就不适合了,还是会需要选择不锈钢等材质。对于FPLC在系统配置上的选型和生物液相又有所区别,很多PH、电导等检测器就无需再配置,而且FPLC所涉及的填料内径较大,柱管的大小选择,流动相的流速选择对于整体方案的影响也会比较大。


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